室内设立多层木架立体栽培,每层用10-15厘米宽的木板在架的四周框住,并铺上7厘米厚的砂土,砂土湿度保持在40%左右。将虫草菌子囊孢子悬浮液适当稀释,再将适龄幼虫置于木架砂土层上,用喷雾器将子囊孢子悬液均匀喷散在虫体上,用树叶遮盖。然后用孢子悬液喷洒树叶,每天喷2次,连续喷2天。喷洒时间选择傍晚、阴天效果更好。开始7天每天检查,观察幼虫是否入土,并观察幼虫是否已被感染。至收获季节(6-7月),翻开遮荫物,采集已露出砂土面的子座和虫体。
容器为广口瓶。培养料为菜园土加15%的泥土,或黄泥土加10%的泥砂。培养料的pH为6-7。将培养料充分拌均后装瓶,不要装得太紧,广口瓶装至瓶肩。装完后集中在一起,放到荫蔽的地方,用树叶遮盖每个容器口。将适龄幼虫集中接种,接种过的幼虫放入容器内,开始7天每天检查,观察幼虫是否入土,是否已被感染,防止幼虫爬出瓶外。到夏季7-8月扒开泥土,采集已长出子座的冬虫夏草。
蝙蝠蛾整个生活史中,幼虫期最长,至少经历2年时间才能化蛹。扁辐蛾幼虫主要取食莎草料篙草属植物和蓼科珠芽蓼、头花蓼、小大黄,以及豆科黄茋属植物和蔷薇科金腊梅等。饲养虫草昆虫可在野外饲养,也可在人工饲养室进行。可在自然或人工条件下栽培幼虫喜食的珠芽蓼等植物,也可用配合饲料来饲养。
先制备虫草菌子囊孢子悬浮液,用微型喷雾装置把子囊孢子喷散到虫草蝙蝠蛾幼虫主体上。为了获得较大的感染机会,还要在幼虫的食物中混入虫草菌菌丝体。一般可通过虫体壳颜色的变化来判断幼虫是否已感染。幼虫感染几天后,主体的外壳会出现很明显的褪色现象,由深褐色转为淡黄色;已感染虫草菌的幼虫,动作逐渐迟缓,最终死亡僵化。将已接种的幼虫放置到幼虫自然生存环境中,让虫草菌利用虫体内营养生长繁殖,长出子座,第2年夏天人工采集己长出子座的主体,即冬虫夏草。
冬虫夏草寄主蝙蝠蛾幼虫为乳黄色,头壳红紫色,一般生长在海拔4000米左右的高山草甸地带。这里气候多变,常有雨雪,气温在0-23℃,20厘米深处的地温为5-75℃,空气相对湿度为50%-70%,土壤含水量40%-60%。蝙蝠蛾幼虫多分布于阳光充足、排水良好、环境潮湿的地势和地貌上。1年中的7-9月土壤中都可找到该虫,一般在土壤10厘米以下深处越冬。
盐酸硫胺素100毫克,核黄素25毫克,吡哆醇25毫克,泛酸钙100毫克,对氨基苯甲酸25毫克,氯化胆碱100毫克,肌醇100毫克,烟酰胺100毫克,叶酸2.5毫克,生物素1毫克,蒸馏水500毫升,过滤灭菌后,取一定体积加入已灭过菌的培养基。
取虫草尚未成熟且颜色正常的子座或具有外膜包裹的菌核,表面消毒后,在无菌条件下切去外层,再切取内部白色组织l毫米左右大小,压碎后将碎粒涂于培养基表面, 20℃培养,一般4个月后可得到母种。
感染虫草的必须是有性生殖孢子,即子囊孢子;虫草菌的分离方法有组织分离法、稀释分离法等。稀释分离法适用于虫草子囊孢子的分离,可进行单孢分离。组织分离法最常用。
蛋白胨10克,葡萄糖100克,酵母膏1克,硫酸镁O.5克,磷酸二氢钾1克,琼脂20克,蒸馏水1000毫升,维生素液20毫升。
B.蛋白胨1%,葡萄糖10%,酵母膏0.1%,硫酸镁0.05%,磷酸二氢钾0.1%,琼脂2%,蒸馏水1000毫升。
配方B有可能长出子座。将培养料按常规方法装瓶或装试管、三角瓶,菌种为人工培养虫草菌菌丝体,接种后置26-28℃培养5-7天或更长时间。
将冬虫夏草菌种接种到含有葡萄糖(10克)、蛋白胨(10克)、含脂蚕蛹(10克)、全脂奶粉(10克)、磷酸二氢钠(1.5克)、磷酸二氢钾(1.5克)、琼脂(20克)和蒸馏水(1000毫升)的培养基上,26℃培养3天即可长出白色绒状菌丝体。冬虫夏草菌丝体在这种培养基上生长良好。
4-5龄幼虫感染率最高,老熟幼虫和3龄以下幼虫不被感染。幼虫蜕皮和活动进食增加感染的机会,幼虫体内的微量元素、氨基酸组成对虫草菌的侵染有影响。
用无菌的不易透水的纸制小口袋,套于天然生长或人工栽培的尚未成熟的虫草子座上,待子座成熟,子囊孢子弹射附着于纸袋内壁上。取附有子囊孢子的纸袋100个,浸于1:10的土壤浸液中(取土样1000克,以采集到虫草的土壤为好,加水1000毫升,高压蒸气121℃灭菌30分钟,冷却后双层滤纸过滤,滤液酸碱度调至pH6.0),2小时后用小刀仔细把子囊孢子从小袋上刮出,收集于离心管中,1000转/分离心10分钟,弃去上清液,用无菌土壤浸出液离心洗涤5次,沉淀悬浮于土壤浸出液中,即为虫草子囊孢子悬浮液。